Чтобы избежать ошибок, необходимо использовать активные, с достаточно высоким титром сыворотки при соотношении объема исследуемой крови и стандартной сыворотки 1:5, Г: 10. Иссле­дование проводят при температуре не выше 25°С; оценивать результаты следует не ранее чем через 5 мин от начала иссле­дования.

Выявление агглютинации при ее фактическом отсутствии может быть обусловлено подсыханием капли сыворотки и образованием «монетных» столбиков эритроцитов или проявлением холодовой агглютинации, если исследование проводят при температуре окру­жающей среды ниже 15°С. Добавление капли изотонического раствора хлорида натрия к исследуемой крови и сыворотке и проведение исследований при температуре выше 15°С позволяют избежать указанных ошибок. Ошибки в определении группы крови всегда связаны с нарушением методики исследования, поэтому необходимо тщательное соблюдение всех правил иссле­дования.

Во всех сомнительных случаях необходимо произвести повтор­ное исследование групповой принадлежности со стандартными сыворотками других серий или с помощью стандартных эритро­цитов.

Определение группы крови системы АВО с помощью моноклональных антител анти-А и анти-В (целиклоны анти-А и анти-В). Целиклоны анти-А н анти-В применяются для определения группы крови человека системы АВО взамен стандартных изогемагглютиннруюших сывороток путем выявления антигенов А и В в эри­троцитах стандартными антителами, содержащимися в целиклонах:

Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, полученными в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Названные целиклоны представляют разведен­ную асцитическую жидкость мышей — носителей гибридомы, со­держащую иммуноглобулин М против антигенов А и В. Целиклоны дают более быструю и более выраженную реакцию агглютинации, чем стандартные АВО-сыворотки. При использовании целиклонов исключается передача вируса гепатита и ВИЧ.

Определяют группу крови при температуре от 15 до 25°С. На фарфоровую пластину или маркированную тарелку наносят по одной большой капле целиклонов анти-А и анти-В, рядом наносят каплю исследуемой крови в 10 раз меньшего размера и смешивают отдельными палочками или уголками предметных стекол. Пластин­ку слегка покачивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин. Реакция обычно наступает впервые 3—5 с и проявляется обра­зованием мелких красных агрегатов, а затем хлопьев. Возможны следующие варианты реакции агглютинации.

1. Агглютинация отсутствует с целиклонами анти-А и анти-В - кровь не содержит агглютиногенов А и В — исследуемая кровь группы 1

2. Агглютинация наблюдается с целиклонами анти-А, эритро­- циты исследуемой крови содержат агглютиноген А — исследуе­ мая кровь группы II (А).

3. Агглютинация наблюдается с целиклоном анти-В. Эритро­ циты исследуемой крови содержат агглютиноген В — исследуемая кровь группы II(В).

4. Агглютинация наблюдается с целиклонами анти-А и анти-В.Эритроциты содержат агглютиногены А и В — исследуемая кровь группы 4(АВ)

5. При наличии реакции агглютинации с целиклонами анти-А и анти-В [группа крови 4(АВ)] для исключения неспецифической агглютинации производят дополнительное контрольное исследова­ние с изотоническим раствором хлорида натрия. Большую каплю (0,1 мл) изотонического раствора смешивают с маленькой (0,01 мл) каплей исследуемой крови. Отсутствие агглютинации подтверждает принадлежность исследуемой крови к 4(АВ) груп­пе. При наличии агглютинации проводят определение группы крови с использованием отмытых стандартных эритроцитов.

Цел и клоны анти-А и анти-В выпускаются в жидком виде в ампулах или флаконах, жидкость окрашена в красный (анти-А) и синий (анти-В) цвет. Хранят их в холодильнике при температуре 2—8°С. Срок хранения 2 года.

Определение резус-фактора

. Исследование крови на резус-при­надлежность методом конглютинации проводят с помощью спе­циальных сывороток анти-резус в лабораторных условиях. В экст­ренных ситуациях возможно определение резус-фактора экспресс методом у постели больного. Предварительно проводят определе­ние групповой принадлежности (по системе АВО).

Оснащение: две различные серии стандартных сывороток анти­резус, соответствующих групповой принадлежности определяемой крови, или совместимые в групповом отношении стандартные отмытые одногруппные резус-положительные и резус-отрицатель­ные эритроциты, чашка Петри, водяная баня, пипетки для сыворо­ток, предметные стекла или стеклянные палочки.